Обнаружение витамина а в рыбьем жире

Практическая работа «Определение витаминов в продуктах питания».
1.
 «Количественное определение содержания витамина С в продуктах питания йодометрическим методом». 
Оборудование и реактивы: фарфоровые ступки с пестиками, пипетки градуированные, весы; спиртовый раствор йода (5%), раствор крахмала (1%), раствор
HCl (1%), картофель с кожурой, морковь, ель, мандарин, квашенная капуста, яблоко (двух сортов), апельсин, сосна, лимонник в сахаре, лук, кожура 
лимона, мякоть лимона, картофель (варёный), морковь (варёная).
Ход работы: Мы взвесили 1 г исследуемого продукта и растёрли его в ступке, добавили 5 мл воды, несколько капель крахмала и немного соляной кислоты 
для инактивации фермента аскорбиноксидазы. В качестве окислителя мы использовали йод. Для удобства 5%­ный раствор йода мы разбавили водой в 40 
раз, при этом получили 0,125%­ный раствор, 1 мл которого соответствует 0,875 мг аскорбиновой кислоты. Затем провели титрование этим раствором йода
исследуемой жидкости в ступке до появления устойчивого синего окрашивания крахмала, которое говорит о том, что вся аскорбиновая кислота 
окислилась. Записали количество раствора йода, пошедшего на титрование, и произвели расчёт. Для этого мы составили пропорцию, зная что 1 мл 0,125%­
ного раствора йода окисляет 0,875 мг аскорбиновой кислоты.
Обработка полученных результатов (на примере яблока): На титрование 1 г яблока ушло 0,03 мл раствора йода. Составили пропорцию: 1 мл йодного 
раствора – 0,875 мг аскорбиновой кислоты 0,03 мл­ X X= 0, 03* 0,875/1=0,026 (мг) Итак, в 1 г яблока содержится 0,026 мг аскорбиновой кислоты. Тогда в 
100 г яблока содержится 0,026*100=2,6(мг) аскорбиновой кислоты. Считая, что суточная норма потребления витамина С 70 мг, мы рассчитали суточную 
норму потребления продукта: 100 г – 2,6 мг Х­ 70 мг Х=100*70/2,6=2692г Подобным образом мы рассчитали содержание витамина С в остальных 
продуктах. Полученные данные занесли в таблицу.
2. Определение содержания витамина А.
Витамин А (ретинол). Качественная реакция:  метод основан на взаимодействии ретинола с гидрохлоридом анилина с образованием окрашенных
продуктов.
Методика работы:
В   сухую   пробирку   поместила   10   капель   анилинового   реактива   и   прибавила   5   капель   рыбьего   жира.   Содержимое   пробирки   осторожно   при
постоянном перемешивании нагрела до кипения и кипятила в течение 30 секунд. В присутствии витамина А желтая эмульсия приобрела в начале грязно­
зеленое, а затем буро­красное и красное окрашивание.
Полученные результаты: 
Витамин А присутствует в рыбьем жире. Окраска изменилась до грязно­зеленого цвета, а затем стала бурой. В пробирку налили 1мл подсолнечного 
масла и добавили несколько капель раствора хлорида железа (III). Если наблюдается ярко­зеленое окрашивание, то в масле содержится витамин А. 
3. Определение содержания витамина Е.
Витамин Е (токоферол). Качественная реакция: реакция с азотной кислотой.
Методика работы:
В фарфоровую чашку с 5 каплями раствора токоферола добавила 10 капель концентрированной азотной кислоты. Раствор окрасился в желто­
красный цвет.
Полученные результаты:
В фарфоровую чашку к 5 каплям растительного масла «Золотая семечка» добавила 10 капель азотной кислоты. Раствор окрасился в оранжевый
цвет. Витамин Е присутствует, но в малом количестве (Приложение 2). 4. Определение содержания витамина С.
Витамин С (аскорбиновая кислота). Качественная реакция: восстановление йода.
Методика работы: 
Взяла 2 фарфоровые чашки, в них по 10 капель дистиллированной воды и по 2 капли раствора Люголя. В 1 чашечку добавила еще 10 капель
дистиллированной   воды,   а   во   6  капель   раствора   аскорбиновой   кислоты.   В  первой   чашечке   –  реакции   нет,   во   второй   –   светло­коричневый   раствор
обесцвечивается.
Полученные результаты:
Взяла 5 фарфоровых чашек. Во все добавила по 10 капель дистиллированной воды и по 2 капли Люголя, а затем в каждую вносила 6 капель
исследуемого продукта. В первую чашку добавила яблочный сок «Добрый», во вторую – сок мандарина, в третью – лимонную кислоту, в четвертую –
детское пюре «Агуша», в пятую – вытяжку хвои.
Раствор обесцветился во всех чашках, кроме опыта с соком. При использовании яблочного сока обесцвечивание йода не произошло. Это говорит о
том, что в соке было мало аскорбиновой кислоты. Качественно прошла реакция с пюре и мандарином. В этих продуктах витамина С достаточное
количество (Приложение 3).
Качественная реакция: реакция с нитратом серебра.
Методика работы:
В фарфоровую чашечку налила 1мл (миллилитр) раствора аскорбиновой кислоты и добавила в неё 2 капли раствора нитрата серебра. Наблюдаю
образование осадка серого цвета (серебро).
Полученные результаты:
Взяла 5 фарфоровых чашек. Во все добавила по 1 мл исследуемого продукта. В первую чашку добавила яблочный сок «Добрый», во вторую – сок
мандарина, в третью – лимонную кислоту, в четвертую – детское пюре «Агуша», в пятую – вытяжку хвои. В каждую чашку добавила 2­3 капли раствора
нитрата серебра. Осадок образовался с продуктами – мандарин, пюре, вытяжка хвои. Витамин С присутствует в этих продуктах 
Опыт 2. Определение витамина С в яблочном соке
В пробирку налили 2 мл сока и добавили воды, доведя объем до 10 мл.
Затем добавим немного крахмального клейстера. Затем по каплям до появления устойчивого синего окрашивания на 10­15 с добавляют раствор иода. 
Техника определения основана на том, что молекулы аскорбиновой кислоты легко окисляются иодом. Как только йод окислит всю аскорбиновую кислоту,
следующая же капля, прореагировав с крахмалом, окрасит раствор в синий цвет.
Опыт 3. Определение витамина D в рыбьем жире или курином желтке
В пробирку налили 1 мл рыбьего жира и прилили 1 мл раствора брома. Если наблюдается зеленовато­голубое окрашивание, то в жире содержался витамин 
D. Выводы. 
Практическая работа  «Определение витаминов А, С, Е, D».
Этапы работы
Действия 
Определение
витамина А
Определение
витамина С
Определение
витамина Е
Определение
витамина D
1. Образец витамина  А
исследую 1­% раствором 
хлорида железа (III)
2. Исследую образец
 выданного вещества 
……………………………..…
1. В фарфоровую
 чашку, поместили 10 капель
дистиллированной   воды,   2
капли   раствора   Люголя   и   6
капель
раствора
аскорбиновой кислоты. 
2. Исследую образец
 
 выданного вещества 
……………………………..…
1. В фарфоровую чашку с
 5 каплями раствора витамина
Е   (токоферола)   добавили   10
капель
  концентрированной
азотной кислоты. 
2.
 выданного вещества 
……………………………..…
1. В пробирку налили 1 
мл рыбьего жира и прилили 1 
мл раствора брома.
Исследую образец
2.
Наблюдения 
1. образуется ярко­зеленое
окрашивание
2.
1. светло­
коричневый раствор 
обесцвечивается
2.
1. Раствор
 окрасился в желто­
красный цвет.
2.
1. Наблюдается
 зеленовато­голубое 
окрашивание
2.
1. 
2.
1. 
2.
1. 
2.
1. 
2. Вывод:
Витамин D 
  
Витамин А
Витамин  Е
Витамин D — группа биологически активных веществ (в том
числе холекальциферол и эргокальциферол). Холекальциферол (витамин D3) синтезируется под
действием ультрафиолетовых лучей в коже и поступает в организм человека с пищей. 
Витамин A представляет собой циклический непредельный спирт. Вещества группы витамина 
A являются кристаллическими веществами. Они нерастворимы в воде, но хорошо растворимы в 
органических растворителях.
Ретинол разлагается кислородом воздуха и очень чувствителен к свету. Все соединения склонны
к цис­транс­изомеризации, особенно по связям 11 и 13, однако кроме 11­цис­ретиналя все 
двойные связи имеют транс­конфигурацию
Соединения группы витамина Е являются светло­желтыми вязкими жидкостями. Не 
растворимы в воде, хорошо растворимы в хлороформе, эфирах, гексане, хуже — 
вацетоне и этаноле. Растворы интенсивно флуоресцируют (максимум возбуждения 295 нм, 
излучения — 320—340 нм). Устойчивы к действию минеральных кислот ищелочей. При 
взаимодействии с O2 и другими окислителями превращаются в хиноны (сложные 
эфиры витамина значительно более устойчивы к окислению). Разлагаются при 
действии ультрафиолета. В атмосфере инертного газа стабильны при нагревании до 100°С Витамин С
По физическим свойствам аскорбиновая кислота представляет собой белый кристаллический 
порошок кислого вкуса. Легко растворим в воде, растворим в спирте. Выполняет биологические
функции восстановителя и кофермента некоторых метаболических процессов, 
являетсяантиоксидантом. Биологически активен только один из изомеров — L­аскорбиновая 
кислота, который называют витаминомC. В природе аскорбиновая кислота содержится во 
многих фруктах и овощах. Авитаминоз аскорбиновой кислоты приводит к цинге.

4. ВИТАМИНЫ

4.5. Практическая часть. Обнаружение витаминов

Цель работы — изучить структуру и некоторые качественные реакции витаминов.

Опыт 1. Диазореакция на витамин В1 (тиамин)

В основе этого метода обнаружения лежит способность тиамина образовывать в щелочной среде с диазореактивом (диазо- сульфаниловой кислотой) комплекс оранжевого цвета.

Диазореактив готовят, внося в пробирку по 5 капель 1 % раствора сульфаниловой кислоты (Н2NС6Н4SO3Н) и 5 капель 5 % раствора нитрита натрия (NaNO2). В эту же пробирку добавляют на кончике скальпеля порошок витамина В1 или 2 — 3 капли раствора витамина В1 для инъекций, затем по стенке наклоненной пробирки осторожно приливают 5 — 7 капель 10 % раствора карбоната натрия (Na2CO3). На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжево-красного цвета.

Опыт 2. Реакция окисления витамина В1 в тиохром

Витамин В1 под действием железосинеродистого калия окисляется в тиохром — пигмент желтого цвета:

В пробирке смешивают 3 — 5 капель 5 % раствора витамина В1 (или 1 — 2 мг порошка) с 5-10 каплями 10 % раствора гидроксида натрия (NаОН) и добавляют 1 — 2 капли 5 % раствора железосинеродистого калия — К3Fe(СN)6. При нагревании смесь окрашивается в желтый цвет в результате окисления тиамина в тиохром, который в щелочном растворе при облучении ультрафиолетом дает интенсивную флуоресценцию.

В отчете указать ее цвет.

Опыт 3. Реакция восстановления витамина В2 (рибофлавина)

Водород, образующийся при добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте, восстанавливает рибофлавин через промежуточное соединение красного цвета (родофлавин) в бесцветный лейкофлавин.

В ходе опыта окраска раствора переходит в розовую, затем раствор обесцвечивается.

В пробирку вносят 10 капель взвеси рибофлавина в воде (0,025 % раствор), туда же добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты (НСI) и небольшой кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином, и окраска раствора переходит из желтой в красную и розовую, а затем раствор обесцвечивается и не флуоресцирует.

Опыт 4. Качественная реакция на рутин (витамин Р)

Метод основан на взаимодействии рутина и хлорида железа (III) с образованием комплексного соединения зеленого цвета, имеющего следующее строение:

На аналитических весах взвешивают 100 мг чая, помещают навеску в стакан объемом 50 мл, добавляют 15 мл дистиллированной воды и кипятят в течение 3 минут. Дают смеси остыть, отбирают в пробирку 1 мл жидкости и вносят в нее несколько кристалликов хлорида железа (III) — FеСl3. Перемешивают и разбавляют в 2 — 3 раза дистиллированной водой. Наблюдают за появлением окрашивания.

В отчете сделать вывод о присутствии в чае витамина Р.

Опыт 5. Восстановление феррицианида калия витамином С

Метод основан на том, что аскорбиновая кислота, содержащаяся в вытяжке из шиповника, восстанавливает железосинеродистый калий. Продукт восстановления образует с хлорным железом (III) плохо растворимую в воде соль — берлинскую лазурь, выпадающую в виде темно-синего осадка.

В каждую из двух пробирок вносят по 2 — 3 капли 5 % раствора железосинеродистого калия — К3Fе(СN)6 и 1 % раствора хлорида железа (III) — FеСl3, перемешивают. Жидкость приобретает бурую окраску. Затем в первую пробирку добавляют 5 — 10 капель 1 % вытяжки из шиповника, а во вторую — такое же количество дистиллированной воды. В первой пробирке жидкость окрашивается в зеленовато-синий цвет, а затем выпадает темно-синий осадок (берлинская лазурь), который при осторожном наслаивании дистиллированной воды становится более отчетливым. Во второй пробирке жидкость окраски не меняет.

Опыт 6. Йодная проба на витамин С

При добавлении раствора сока лимона или раствора аскорбиновой кислоты к раствору Люголя последний обесцвечивается за счет восстановления молекулярного йода аскорбиновой кислотой и образования йодистоводородной кислоты.

В две пробирки вносят по 10 капель дистиллированной воды и по 1 — 2 капле раствора Люголя (0,1 % раствор йода — I2 в 2 % растворе йодида калия — Кl). В одну пробирку добавляют на кончике шпателя порошок аскорбиновой кислоты (или 10 капель раствора сока лимона), а в другую — несколько капель дистиллированной воды. В пробирке с аскорбиновой кислотой раствор йода обесцвечивается.

Опыт 7. Проба Друммонда на ретинол (витамин А)

Метод основан на способности серной кислоты дегидратировать ретинол с образованием окрашенных продуктов. При смешивании раствора рыбьего жира, содержащего витамин А, в хлороформе с концентрированной серной кислотой происходит окрашивание смеси в красно-бурый цвет.

В сухой пробирке смешивают 2 капли рыбьего жира с 5 каплями хлороформа (СНСl3) и добавляют 1 — 2 капли концентрированной серной кислоты (Н2SO4). Окраска раствора изменяется.

Опыт 8. Качественная реакция на витамин Е (токоферол)

В сухую пробирку вносят 5 капель 0,1 % спиртового раствора витамина Е и10 капель концентрированной азотной кислоты (HNO3), энергично встряхивают. На границе двух фаз расслоившейся эмульсии со временем появляется кольцо красного цвета.